PCR實驗室現(xiàn)存的不足

▲1、PCR實驗過程中易發(fā)生污染

① PCR擴增產(chǎn)物的污染。這也是*常見的污染原因。PCR產(chǎn)物經(jīng)反復(fù)多次的擴增，其復(fù)制量遠遠超過PCR的檢測極限，所以即使是極微量的污染也足以造成實驗結(jié)果假陽性。

② 試劑的污染。在試劑的配制過程中，接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。

③ 待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導(dǎo)致樣品被污染;另外，某些樣品中含有病毒，若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。

④ 氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴散至空氣中極有可能造成PCR產(chǎn)物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產(chǎn)生的，開蓋、晃動反應(yīng)管及污染加樣器的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠從而導(dǎo)致交叉污染。據(jù)計算一個氣溶膠顆粒可含48 000 拷貝，因此，應(yīng)尤其重視由氣溶膠導(dǎo)致污染的問題。PCR 實驗室只要出現(xiàn)了污染，之前的結(jié)果報告就變?yōu)闊o效而且也無法進行其他的實驗操作。必須找出并徹底清除污染源，才能得到準(zhǔn)確有效的實驗結(jié)果。

▲2、實驗室的質(zhì)量控制存在缺陷

實驗室的質(zhì)量控制分為：室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制。

室內(nèi)質(zhì)量控制是指實驗室人員通過一定的方法和步驟，連續(xù)評價實驗室工作的可靠程度，旨在監(jiān)測和控制實驗室常規(guī)工作的精密度，提高實驗室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠及可否發(fā)出報告的一項工作。

室間質(zhì)量控制是指客觀比較實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外部機構(gòu)采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。

▲3、規(guī)范管理不到位

為了提高實驗室的檢測質(zhì)量，避免實驗室污染以及確保實驗室的生物安全，規(guī)范有效的管理是實現(xiàn)這一切的根本措施。但有時會出現(xiàn)管理不到位甚至是疏忽的地方，比如隨意出入實驗室，甚至逆行;沒有按照規(guī)范穿戴口罩、鞋套;試驗期間緩沖間兩側(cè)門同時打開;實驗完畢后忘記開紫外燈消毒等。

pcr實驗室解決污染辦法

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