PCR實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)存的不足

▲1、PCR實(shí)驗(yàn)過程中易發(fā)生污染

① PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。這也是*常見的污染原因。PCR產(chǎn)物經(jīng)反復(fù)多次的擴(kuò)增，其復(fù)制量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過PCR的檢測(cè)極限，所以即使是極微量的污染也足以造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽性。

② 試劑的污染。在試劑的配制過程中，接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。

③ 待測(cè)樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導(dǎo)致樣品被污染;另外，某些樣品中含有病毒，若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。

④ 氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴(kuò)散至空氣中極有可能造成PCR產(chǎn)物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產(chǎn)生的，開蓋、晃動(dòng)反應(yīng)管及污染加樣器的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠從而導(dǎo)致交叉污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48 000 拷貝，因此，應(yīng)尤其重視由氣溶膠導(dǎo)致污染的問題。PCR 實(shí)驗(yàn)室只要出現(xiàn)了污染，之前的結(jié)果報(bào)告就變?yōu)闊o效而且也無法進(jìn)行其他的實(shí)驗(yàn)操作。必須找出并徹底清除污染源，才能得到準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

▲2、實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制存在缺陷

實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制分為：室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制。

室內(nèi)質(zhì)量控制是指實(shí)驗(yàn)室人員通過一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作的可靠程度，旨在監(jiān)測(cè)和控制實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的精密度，提高實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠及可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。

室間質(zhì)量控制是指客觀比較實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外部機(jī)構(gòu)采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。

▲3、規(guī)范管理不到位

為了提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量，避免實(shí)驗(yàn)室污染以及確保實(shí)驗(yàn)室的生物安全，規(guī)范有效的管理是實(shí)現(xiàn)這一切的根本措施。但有時(shí)會(huì)出現(xiàn)管理不到位甚至是疏忽的地方，比如隨意出入實(shí)驗(yàn)室，甚至逆行;沒有按照規(guī)范穿戴口罩、鞋套;試驗(yàn)期間緩沖間兩側(cè)門同時(shí)打開;實(shí)驗(yàn)完畢后忘記開紫外燈消毒等。

pcr實(shí)驗(yàn)室解決污染辦法

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